Mengenal Lebih Dekat Bakteri Salmonella sp.

Morfologi Salmonella

Salmonella merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang fakultatif. Genus Salmonella dinamai oleh seorang ahli patologi hewan Amerika yang bernama Daniel Elmer Salmon, namun Theobald Smith adalah penemu sebenarnya dari jenis bakteri (Salmonella enterica var. choleraesuis) pada 1885, yang menyebabkan penyakit enterik pada  babi (Pratiwi, 2011).

Ciri-ciri dari bakteri Salmonella adalah sebagai berikut (Pratiwi, 2011):

1.   Berbentuk batang dengan ukuran tergantung jenis bakteri (pada umumnya memiliki panjang ± 2-3 µm, dan bergaris tengah antara ±0,3 – 0,6 µm ).

2.  Bersifat Gram negatif.

3.  Berkembang biak dengan cara membelah diri.

4.  Tidak berspora dan bersifat aerob.

5.  Motil (pergerakan ) dengan mengunakan flagel. Mempunyai flagel perithrik (diseluruh permukaan sel), kecuali pada jenis Salmonella gallinarum dan Salmonella pullorum.

6.  Salmonella mudah tumbuh pada medium sederhana, tetapi hampir tidak pernah memfermentasikan laktosa atau sukrosa.

7.  Salmonella membentuk asam dan kadang-kadang gas dari glukosa dan manosa.

8.  Salmonella resisten terhadap bahan kimia tertentu  (misal, hijau brilian, natrium tetrationat,natrium deoksikolat) yang menghambat bakteri enterik lain,oleh karena itu senyawa – senyawa tersebut berguna untuk inklusi isolate salmonella dari feses pada medium.

9.  Struktur sel bakteri Salmonella terdiri dari  inti (nukleus), sitoplasma, dan dinding sel. Karena dinding sel bakteri ini bersifat Gram negatif , maka memiliki struktur kimia yang berbeda dengan bakteri Gram positif.

Menurut Jawetz et al (dalam Bonang,1982) mengemukakan bahwa dinding sel bakteri gram negatif mengandung 3 polimer senyawa mukokompleks yang terletak diluar lapisan peptidoglikan (murein). Ketiga polimer ini terdiri dari :

1.   Lipoprotein adalah senyawa protein yang mempunyai fungsi menghubungkan antara selaput luar  dengan lapisan peptidoglikan.

2.  Selaput luar adalah selaput ganda yang mengandung senyawa fosfolipid dan sebagian besar dari senyawa fosfolipid ini terikat oleh molekul-molekul lipopolisakarida pada lapisan atasnya (Pratiwi, 2011).

    Klasifikasi Salmonella

Berikut klasifikasi dari bakteri Salmonella (Pratiwi, 2011) :

Kerajaan       : Bacteria

Filum    : Proteobakteria

Kelas    : Gamma proteobakteria

Ordo     : Enterobakteriales

Family   : Enterobakteriaceae

Genus   : Salmonella

Spesies         : Salmonella enterica

            Salmonella arizona

              Salmonella typhi

              Salmonella choleraesuis

              Salmonella enteritidis

Secara praktis salmonella dapat dibagi menjadi (Pratiwi, 2011) :

1.     Salmonella  tifoid yaitu Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A,B, dan C penyebab demam enterik (typhoid) pada manusia. Kelompok ini telah beradaptasi pada manusia.

2.  Salmonellanon-tifoid yaitu Salmonelladublin (sapi),Salmonella cholera suis (babi),Salmonellagallinarum dan Salmonella pullarum (unggas), Salmonella aborius equi (kuda) dan Salmonella aborius ovis (domba). Salmonella sp yang beradaptasi pada jenis hewan tertentu jarang menimbulkan penyakit pada manusia.

 Metode Analisa

Metode analisa merupakan proses pembuktian atau konfirmasi pengujian secara obyektif di laboratorium yang telah memenuhi persyaratan yang telah ditentukan dan sesuai dengan tujuan penggunaannya. Dalam pengujian mutu suatu bahan pangan diperlukan berbagai uji yang mencakup uji fisik, uji kimia, uji mikrobiologi, dan uji organoleptik (Fardiaz, 1993).

Dalam hal ini, metode analisa yang digunakan untuk mengidentifikasi adanya bakteri Salmonella adalah metode analisa secara kualitatif yakni bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya suatu bakteri Salmonella  dalam  suatu  feses (Sugianto, 2012).

a.      Metode Analisa Kualitatif

Pada pengujian identifikasi bakteri Salmonella metode yang digunakan adalah metode analisa secara kualitatif. Pada metode analisa kualitatif ini memiliki tahapan – tahapan tertentu dengan tujuan untuk mengetahui ada tidaknya suatu mikroorganisme dalam feses (Sugianto, 2012).

Tujuan dari pengidentifikasian dalam uji suatu bakteri (Salmonella) pada metode ini adalah untuk mengetahui mutu ataupun kualitas dari suatu produk berdasarkan kemasan atau sifat mikrobiologinya. (Sugianto, 2012).

b.     Uji Salmonella

Uji Salmonella digunakan untuk menetapkan adanya Salmonella dalam makanan.Salmonella merupakan bakteri gram-negatif berbentuk tongkat yang menyebabkan tifus, paratifus, dan penyakit foodborne. Salmonella terdiri dari sekitar 2500 serotipe yang kesemuanya diketahui bersifat pathogen baik pada manusia atau hewan (Sugianto, 2012).

Pada pengujian Salmonella ini dibuat juga kontrol positif yaitu sampel yang telah diberi biakan kultur Salmonella sebagai pembanding. Dari pengkayaan selektif, biakan dari MKTTn dan RVS diinokulasikan pada media BGA dan XLD untuk tahap inokulasi dan identifikasi. Pada tahap ini hanya biakan dari BGA yang berasal dari MKTTn yang menunjukkan pertumbuhan koloni. Sedangkan pada media XLD tidak ada pertumbuhan koloni. Selanjutnya koloni dari biakan BGA dilakukan uji identifikasi yaitu uji biokimia dan uji serologi. Uji biokimia yang dilakukan antar lain sebagai berikut:

1. Uji TSIA

Pada uji TSIA warna media slant berubah menjadi merah karena bakteri bersifat basa ini menandakan bahwa bakteri ini tidak memfermentasi laktosa dan sukrosa. Pada media daerah butt media berubah berwarna kuning ini menandakan bakteri memfermentasi glukosa. Pembentukan gas positif ini hasil dari fermentasi H2 dan CO2 dapat dilihat dari pecahnya dan terangkatnya agar.Pembentukan H2S positif ditandai dengan adanya endapan berwarna hitam. TSIA agar mengadung laktosa dan sukrosa dalam konsentrasi 1%, glukosa 0,1% dan phenol red sebagai indikator yang menyebabkan perubahan warna dari merah orange menjadi kuning dalam suasana asam. TSIA juga mengandung natrium trisulfat, yaitu suatu substrat untuk penghasil H2S, ferro sulfat menghasilkan FeS (precipitat), bewarna hitam untuk membedakan bakteri H2S dengan bakteri-bakteri lainnya (Sugianto, 2012).

2. Uji Urease

Uji urease digunakan untuk mengetahui kemampuan mikroba menghidrolisis urea menjadi amonia. Enzim urease akan menguraikan urea menjadi amonia. Uji urease menunjukkan hasil positif jika terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah keunguan. Hasil uji urease negatif jika tidak terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah keunguan (Sugianto, 2012).

3. Uji Dekarboksilasi Lysin

Uji Dekarboksilasi Lysin menggunakan media Xylose-Lysine- Desoxycholate Agar medium digunakan untuk isolasi Salmonella danmemilah organisme lain dengan cara memfermentasi xylose, dekarboksilasi lysine dan produksi H2S. Fermentasi xylose sangat lazim bagi kebanyakan organisme enterik kecuali, Shigella, Providencia, Edwardsiella. Pada media ini, Salmonella akan membentuk koloni merah dengan inti hitam, sedang Pseudomonas dapat tumbuh dengan warna merah dan Eschericia berwarna kuning. Mikroba lain yang dapat tumbuh pada media ini antara lain Arizona, Proteus, Aerobacter, Klebsiella,Citrobacter. Begitu banyak mikroba yang dapat tumbuh, sehingga media ini kurang dapat memilah Salmonella pada tahap awal.Lebih baik digunakan untuk tahap konfirmasi kontaminan Salmonella (Sugianto, 2012).

4. Uji β-galaktosidase

Uji β-galaktosidase digunakan utuk identifikasi beberapa jenis bakteri seperti Salmonella.Enzim β-galaktosidase merupakan enzim yang dapat mengubah laktosa menjadi glukosa dan galaktosa. Beberapa mikroorganisme seperti E. coli, dapat menggunakan laktosa sebagai sumber karbon. Selain laktosa, substrat alamiah dari enzim, adalah bahan yang sangat penting, ONPG (o-nitro-phenyl-β-D-galactopyranoside), dapat digunakan pula.Β-galaktosidase dapat mengkatalisis ONPG menjadi galaktosa dan o-nitrofenol. ONPG tidak berwarna tetapi setelah hidrolisis menjadi o-nitrofenol, akan timbul warna kuning pada larutan yang alkali. beberapa jenis bakteri yang mampu melakukan fermentasi terhadap karbohidrat Streptococcus, Lactobacillus, Zygomonas, Saccharomycetes, Escherichia, Enterobacter, Salmonella (Sugianto, 2012).

5. Uji Indol

Uji Indol bertujuan untuk menentukan kemampuan bakteri dalam memecah asam amino triptofan. Media ini biasanya digunakan dalam indetifikasi yang cepat. Hasil uji indol yang diperoleh negatif karena tidak terbentuk lapisan (cincin) berwarna merah muda pada permukaan biakan, artinya bakteri ini tidak membentuk indol dari tryptopan sebagai sumber karbon, yang dapat diketahui dengan menambahkan larutan kovacs. Asam amino triptofan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein, sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme akibat penguraian protein (Sugianto, 2012).

6. Uji Voges Proskauer

Uji Voges Proskauer bertujuan untuk mengidentifikasi jenis bakteri Untuk membedakan bakteri Escherichia coli dengan Enterobacteraerogenes. Hasilnya uji ini negatif, karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelah ditambahkan á-napthol dan KOH, artinya hasil akhir fermentasi bakteri ini bukan asetil metil karbinol (asetolin). Salmonella positif jika pada uji biokimia yang dilakukan hasilnya sebagai berikut (Sugianto, 2012) :

1.    TSIA : butt (+), slant (-), gas positif atau negatif dan H2S positif atau negatif.

2.   Hidrolisis urea : negatif

3.   Dekarbosilasi lysine : positif

4.   Reaksi voges proskauer : negatif

5.   Produksi indol : negatif

6.   Uji serologi: terjadi aglutinasi pada penambahan antisera polivalen O, H, dan Vi.

Pada biakan contoh setelah dilakukan uji biokimia dan serologi didapatkan hasil sebagai berikut(Sugianto, 2012) :

a)   TSIA : butt (-), slant (-), gas negatif dan H2S negatif

b)  Hidrolisis urea : positif

c)   Dekarbosilasi lysine : negatif

d)  Reaksi voges proskauer : negative

e)   Produksi indol : negative

7. Uji Serologi

Uji serologi tidak terjadi aglutinasi pada penambahan antisera polivalen O, H, dan Vi.

Reaksi Biokimia Salmonella

No.	Pengujian	Hasil Reaksi		Reaksi Salmonella sp
		Positif	Negatif
1	Glukosa (TSI)	Tusukan kuning	Tusukan merah	Positif
2	Lysine Decarboxylase (LIA)	Tusukan ungu	Tusukan ungu	Positif
3	H2S (TSI dan LIA)	Hitam	Tidak hitam	Positif
4	Urease	Warna ungu sampai merah	Tidak ada perubahan warna	Negatif
5	Lysine Decarboxylase Broth (LDB)	Warna ungu	Warna kuning	Positif
6	Dulcitol Broth	Warna kuning atau ada gas	Tidak ada perubahan warna dan gas	Positif b
7	KCN Broyh	Pertumbuhan	Tidak ada pertumbuhan	Negatif
8	Malonate Broth	Warna biru	Tidak ada perubahan warna	Negatif C
9	Uji Indol	Warna violet pada permukaan	Warna kuning pada permukaan	Negatif
10	Uji Serologi Polyvalent  Flagellar (H)	Penggumpalan	Tidak ada penggumpalan	Positif
11	Uji Serologi Polyvalent Somatic (O)	Penggumpalan	Tidak ada penggumpalan	Positif
12	Lactose Broth	Warna kuning atau ada gas	Tidak ada perubahan warna dan gas	Negatif C
13	Sucrose Broth	Warna kuning atau ada gas	Tidak ada perubahan warna dan gas	Negatif
14	Uji Voges Proskauer (VP)	Merah muda sampai merah	Tidak ada perubahan warna	Negatif
15	Uji Methyl Red (MR)	Warna merah menyebar	Warna kuning menyebar	Positif
16	Simmons Citrate	Ada pertumbuhan, warna biru	Tidak ada pertumbuhan dan perubahan warna	Variabel

Kriteria untuk kultur non Salmonella

No.	Pengujian	Hasil (non Salmonella)
1	Urease	Positif (warna ungu sampai merah)
2	Uji Indol dan Polyvalent Flagellar (H)	Positif (warna merah pada permukaan Negatif (tidak ada penggumpalan)
3	LDB dan KCN	Negatif (warna kuning) Positif (ada pertumbuhan)
4	Lactose Broth	Positif (warna kuning ada gas)
5	Sucrose Broth	Positif (warna kuning ada gas)
6	Uji VP Uji MR	Positif (merah muda sampai merah) Negatif (warna kuning menyebar)

Daftar Pustaka

Association of Official Analytical Chemistry (AOAC), 2000.Official Methods of Analysis. Mc Graw Hill Press. Canada
Dad.2000.Bacterial Chemistry and Physiology. John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 426.

Association of Official Analytical Chemistry (AOAC), 2000.Official Methods of Analysis. Mc Graw Hill Press. Canada.

Black, J.G. 1999. Microbiology Principles and Exploration 4th Edition. Prentice-Hall Inc. New Jersey

Buckle, K. A., dkk. 1987. Ilmu Pangan.Diterjemahkan oleh Adiono dan Hari Purnomo. UI Press, Jakarta.

Campbell, N. A., J.B. Reece, L.G. Mitchell. 2002. Biologi Jilid 2 edisi Kelima. Jakarta : Erlangga

Cappuccino, J. G. & Natalie S. 1983.Microbiology A Laboratory Manual. Addison-Wesley Publishing Company, New York.

Dad.2000.Bacterial Chemistry and Physiology. John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 426.

Direktorat Jenderal PPM & PLP, Depkes.1996. Pedoman Teknis Sanitasi (Penyehatan) Pengelolaan Makanan Di Rumah Sakit, Jakarta.

Direktorat Jenderal PPM & PLP, Depkes.1996. Pedoman Teknis Sanitasi (Penyehatan) Pengelolaan Makanan Di Rumah Sakit, Jakarta.

Djide, M. Natsir. 2003. Mikrobiologi Farmasi, Jurusan Farmasi UNHAS, Makassar.

Dwidjoseputro, D. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi Cetakan ke-13.Jakarta : Percetakan Imagraph

Dwijoseputro. 1987. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djembatan.

Fardiaz, S. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. PT. Raja Grafindo Persada., Jakarta.

Fardiaz, S. Mikrobiologi Pangan 1. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama
Lim, D. 1998. Microbiology 2nd Edition.McGraw Hill. United States of America.

Fardiaz, S.,.1989. Analisis Mikrobiologi Pangan, Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, IPB.

Fardiaz, S.,.1992. Analisis Mikrobiologi Pangan, Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, IPB

Food and Drug Administration.1998.Bacteriological Analytical Manual. 8th Edition,.FRIEDHEIM, E., AND MICHAELIS, L. 2001 J. Biol. Chem., 91,55-368. Cit. PORTER, J. R.

GAUSE, G. F. 1946 Litmocidin, a new antibiotic substance produced by roactinomyces cyaneus. J. Bacteriol., 51,

Hadioetomo, R. S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek: Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium. PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.

Jurnalair. 2011.Kualitas Air. Diakses di :(http://jurnalair.wordpress.com/2011/01/21/kualitas-air/. Diaksespada : 15April 2012)

Official Chemical Method. 1979. Fish Inspection Branch Fisheries And Ocean. Science Press. Canada.

Pelczar, M. J & E. C. S Chan. 1986.Dasar-dasar Mikrobiologi.UI-Press, Jakarta.

Pelczar, M. J., Chan, E.C.S. 2007 dalam  Soni, Ahmad. 2010 Elements of Microbiology. Mc Graw Hill Book Company. New York.

Pelczar, M.J dan E.C.S. Chan. 2006.Dasar-dasar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta.

Pratiwi, Erni. 2011. Pemeriksaan Salmonella. Diakses di :. http://id.scribd.com/doc/54252133/tugas-bakteri2. Diakses pada : Minggu, 18 November 2012

Ramona, Y., R. Kawuri, I.B.G. Darmayasa. 2007. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Umum Untuk Program Studi Farmasi FMIPA UNUD.Laboratorium Mikrobiologi Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Udayana. Bukit Jimbaran.

Sugianto, Tantri. 2012. Uji Salmonella. Diakses di :http://tantri-sugianto.blogspot.com/2012/07/uji-salmonella.html. Diakses pada : Minggu, 18 November 2012

Sutedjo, M. M. 1991. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta, Jakarta.

Tjay, T. H. 2003. Obat-Obat Penting. PT. Elex Media Komputindo, Jakarta.

Widiyanti, Ni Luh Putu Manik dan Ni Putu Ristianti.2004.Analisis Kualitatif Bakteri Koliform pada Depo Air Minum Isi Ulang di Kota Singaraja Bali.