Pewarnaan Hematoxilin Eosin

Pewarnaan Hematoxilin Eosin (HE)

Pewarnaan ini digunakan untuk mewarnai jaringan.

Prinsip: inti yang bersifat asam akan menarik zat/ larutan yang bersifat basa sehingga akan berwarna biru. Sitoplasma bersifat basa akan menarik zat /larutan yang bersifat asam sehingga berwarna merah.

Pada pewarnaan HE, ada beberapa tahapan yaitu

1. Deparafinisasi

Tujuan: untuk menghilangkan/ melarutkan parafin yang terdapat pada jaringan.

Zat: xylol

2. Rehidrasi

Tujuan: untuk memasukkan air ke dalam jaringan. Air akan mengisi rongga-rongga jaringan yang kosong.

Zat: alkohol absolut, alkohol 90 %, alkohol 80 %

3. Pewarnaan I

Tujuan: untuk memberi warna pada inti dan sitoplasma pada jaringan

Zat: hematoxylin

4. Differensiasi

Tujuan: untuk mengurangi warna biru pada inti dan menghilangkan warna bitu pada sitoplasma

Zat: HCl 0,6%

5. Blueing

Tujuan: untuk memperjelas warna biru pada inti sel

Zat: lithium carbonat 0,5%

6. Pewarnaan II

Tujuan: untuk memberi warna merah pada sitoplasma sel

Zat: eosin

7. Dehidrasi

Tujuan: untuk menghilangkan air dari jaringan

Zat: Alkohol 80 %, Alkohol 90 %, Alkohol 100 % (absolut)

8. Mounting

Tujuan: untuk mengawetkan jaringan yang telah diwarnai

Zat: entellan/ canada balsem

Jaringan yang akan diwarnai HE, sebelumnya telah mengalami “Processing Jaringan” dan dipotong dengan menggunakan mikotrom. Ketebalan jaringan antara 4-6 µm. Jaringan yang telah dipotong sesuai ukuran dilekatkan pada objek glass.

Berikut langkah kerja sebelum pewarnaan HE (persiapan jaringan):

1. Siapkan alat dan bahan yang diperlukan
2. Keluarkan jaringan dari blok/kotak parafin
3. Potong jaringan dengan alat mikotrom dengan ketebalan antara 4-6 µm
4. Ambil 1 slice potongan jaringan, masukkan ke dalam waterbath ( 30-40 C), untuk menghilangkan kerutan pada potongan dan mencairkan parafin.
5. Tempelkan dengan hati-hati potongan jaringan tersebut pada objek glass.
6. Teteskan 1-2 tetes albumin di atas potongan jaringan, lalu dengan menggunakan pinset, rapikan potongan (menghilangkan kerutan ) dengan hati-hati, jangan sampai sobek.
7. Setelah itu, panaskan objek glass yang telah ditempeli jaringan dengan oven pada suhu 30-40 C, bila tidak ada oven, gunakan hotplate. Namun objak glass hanya di gosok-gosokkan agar tidak pecah.

8. Lakukan pewarnaan HE.

No	TAHAPAN	ZAT	WAKTU
1	Deparafinisasi	Xylol I	2-3 celup
2		Xylol II	2-3 celup
3	Rehidrasi	Alkohol 100 %	10 celup
4		Alkohol 90%	10 celup
5		Alkohol 80 %	10 celup
6		AIR	1 menit
7	Pewarnaan	Hematoxylin	1-5 menit
8		AIR	1 menit
9	Differensiasi	HCl 0,6 %	1-2 celup
10		AIR	1 menit
11	Blueing	Lithium Karbonat 0,5 %	3 menit
12		AIR	1 menit
13		Alkohol 95 %	1-2 celup
14	Pewarnaan	Eosin	3 menit
15	Dehidrasi	Alkohol 80%	10 celup
16		Alkohol 90%	10 celup
17		Alkohol 100%	10 celup
18		Xylol I	2-3 celup
19		Xylol II	2-3 celup
20	Mounting	Entelan	1-2 tetes

9. Setelah di beri entelan, tutup dengan cover glass dengan hati-hati agar tidak terdapat gelembung.

10. Jaringan yang telah diwarnai, akan awet lebih dari 5 tahun.